Inovativní příprava vzorků pomocí dehydratace alkoholem a média s vysokým indexem lomu umožňuje pořízení dvoukanálového 3D STED obrazu s vysokým rozlišením celého oocytu.
Michaela Frolikova, Michaela Blazikova, Martin Capek, Helena Chmelova, Jan Valecka, Veronika Kolackova, Eliska Valaskova, Martin Gregor, Katerina Komrskova, Ondrej Horvath, Ivan Novotny
https://doi.org/10.1111/jmi.13363
ABSTRAKT
Mikroskopie s vysokým rozlišením (SR) je špičková metoda, která poskytuje podrobné strukturální informace s vysokým rozlišením. Tloušťka vzorku však byla pro metody SR velkým omezením a velké biologické struktury představovaly výzvu. Klíčovým krokem k překonání tohoto problému je optimalizace přípravy vzorků tak, aby byla zajištěna optická homogenita a čirost, což může zlepšit schopnosti metod SR pro získávání tlustších struktur.
Oocyty jsou největší buňky v těle savců a jsou klíčovými objekty v reprodukční biologii. Jsou obzvláště užitečné pro studium membránových proteinů. Oocyty jsou však extrémně křehké a citlivé na mechanickou manipulaci a osmotické šoky, což činí přípravu vzorků kritickým a náročným krokem.
Představujeme inovativní, jednoduchý a citlivý přístup k přípravě vzorků oocytů pro 3D STED akvizici. Zahrnuje dehydrataci alkoholem a umístění do média s vysokým indexem lomu. Tento rozšířený postup přípravy nám umožnil úspěšně získat jedinečný dvoukanálový 3D STED SR obraz celého oocytu myši. Optimalizací přípravy vzorků je možné překonat současné omezení metod SR a získat vysoce rozlišené obrazy velkých biologických struktur, jako jsou oocyty, za účelem studia základních biologických procesů.
Dosažené rozlišení:
